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吖啶橙(AO)是一种选择性荧光阳离子染料，它能透过细胞膜，活细胞与死细胞均能被其染色。吖啶橙常用于荧光显微镜和流式细胞仪技术中细胞生理学与细胞周期的分析，该细胞渗透型染色液可与其他很多染色液及方法联合使用。

在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过完整细胞膜，将活细胞的细胞核染成均匀的绿色荧光；而凋亡细胞由于其染色质固缩或断裂为大小不等的片段，吖啶橙将细胞核染成黄绿色亮绿色荧光；死亡细胞呈橙色荧光，但荧光很弱甚至会消失。溴化乙锭（EB）只能将具有不完整细胞膜的细胞染色，AO与EB联合使用，将坏死细胞染成橙色或橙红色，但这也包括与活细胞核形态相似的且无染色质固缩的细胞。因此，AO/EB染色试剂盒可以将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区别开来。

• 使用前请将小瓶离心。
  
• 使用前将10×缓冲液用双蒸水稀释成1×缓冲液。
  
• PBS洗涤细胞两次后，用适量的1×缓冲液重悬细胞调整细胞浓度为10⁶个/ml。
  
  • 贴壁细胞可以在盖玻片上或细胞培养孔中原位染色。在某些必要情况下，可使用TritonX-100进行细胞通透。
• 取90μL细胞悬液，加入5μL AO染色液和5μL EB染色液，轻柔混匀。
  
• 室温避光孵育1～5分钟。
  
  • 最佳的染色浓度及培养时间，根据细胞的不同而不同。
• 使用荧光显微镜或流式细胞仪检测细胞荧光。